油镜的透镜很小，光线通过玻片与油镜头之间的空气时，因介质密度不同，发生折射或全反射，使射入透镜的光线减少，物象显现不清。若在油镜与载玻片之间加入和玻璃折射率（n=1.52）相近的香柏油（n=1.515），则使进入透镜的光线增多，视野亮度增强，使物象明亮清晰。
由于细菌体积微小，故在细菌的形态学研究中，经常需要借助显微镜油镜，才能比较清楚地进行观察。因此，必须熟练地掌握油镜的使用及保护法。
二、油镜头的识别
接物镜的放大率可由其外形辨认，镜头长度越大，镜片直径越小，放大倍数大；反之，放大倍数小。油镜头长度大于低、高倍镜，镜头下缘一般刻有一圈黑线或白线，并刻有100×、1.25或oil等字样。
三、油镜的使用法
1 使用显微镜油镜时，必须将显微镜端正直立桌上，不得将镜臂弯曲，使载物台倾斜，以免香柏油流溢，影响观察，污染台面。
2 对光
采用天然光为光源时，宜用平面反光镜；若用人工灯光时，则用凹面镜。
首先打开光圈，转动反光镜，使光线集中于集光器。可根据需要，上下移动集光器和缩放光圈，以获得最佳光度。
一般用低倍镜或高倍镜观察物象或用油镜检查不染色标本时，需下降集光器并适当地缩小光圈，使光度减弱；若用油镜检查染色标本时，光度宜强。应 将显微镜亮度开关调至最亮，光圈完全打开，集光器上升至与载物台相平。
3 调焦距：
①将标本片放载物台上，用标本推进器固定，将欲检部分移至接物镜下。先用低倍镜找出标本的位置，然后提高镜筒，在标本的待检部位滴镜油一滴，再换油镜观察。
②转动粗调节器使载物台徐徐上升（或使镜筒渐渐下降），直至油镜头浸没至油中。此时眼睛应从侧面观察，以免压碎标本片和损坏镜头。
③然后双眼移至接目镜，一面从接目镜观察，一面反方向缓慢地转动粗调节器（下降载物台，或上升镜筒），当出现模糊物象时，换用细调节器，转动至物象清晰为止。
④观察完毕，应先提高镜筒，并将油镜头扭向一侧，再取下标本片。油镜头使用后，应立即用擦镜纸擦净镜头上的油。若镜油粘稠干结于镜头上，可用擦镜纸蘸少许二甲苯擦拭镜头，并随即用干的镜纸擦去残存的二甲苯，以免二甲苯渗入，溶解用以粘固透镜的胶质物，造成镜片移位或脱落。