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当中药遇上HPLC — 使用HPLC指纹图谱鉴别白芍与赤芍

北京绿绵科技有限公司2019-01-14 09:05
 前言

白芍和赤芍属于芍药科芍药属,是同一物种的变种。两者名字中的颜色不是指花的颜色,而是指根的颜色。

在中药中,白芍和赤芍是许多不同药剂配方中使用的重要药材。赤芍在中医中的主要作用是祛血热、活血化瘀,它最重要的用途和适应症是流行性热症的麻疹,呕血,鼻出血,疼痛的红肿眼睛,肿胀,脓肿和疖子等。而白芍最好用作补血补品,也可用作“减热”(或“除热”)肝药。根据中医方法学和理论,白芍有助于治疗腹痛和肌肉痉挛。另外,中医也相信它对出汗也有收敛作用,而且在本质上是抗菌、抗痉挛和抗炎的。

QQ截图20181207160834.png

 

为了确保两种芍药品种的鉴别,我们开发了一种HPLC指纹图谱方法来区别两个芍药品种。

 

结果

对芍药根样进行了分析,表明赤芍和白芍的植物源提取物是不一样的。同时也对芍药配方颗粒提取物进行了测定,并与原植物样品提取物进行了比较,以说明其与赤芍或白芍之间的关系。此外,赤芍和白芍两个样品中主要的活性成分——芍药苷,能很好地被分析标准所识别。图1显示了赤芍和白芍的植物提取物的HPLC图谱,芍药苷在13.40min处被检测到。赤芍的特征组分的保留时间为26min,它在白芍样品中没有被检测到。图2显示了赤芍配方颗粒提取物与赤芍植物提取物的HPLC图谱。有三种组分(保留时间为21.34、22.33、22.63 min)在颗粒物提取物中被检测到,但是植物提取物中未发现。

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图1.  赤芍(蓝色)和白芍(红色)植物提取物的HPLC谱图

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图2.  赤芍配方颗粒(蓝色)和赤芍植物提取物(红色)的HPLC谱图

材料与方法

采用 KNAUER AZURA HPLC plus四元梯度液相色谱系统,结合具有表面多孔填料的 KNAUER Eurospher II100-5 C18 P silica 色谱柱,建立了芍药样品的HPLC分析指纹图谱方法。

 

仪器配置

配置

描述

AZURA P 6.1L

四元梯度泵,0.001~10ml/min,700bar,带脱气机

AZURA AS 6.1L

自动进样器,700 bar,100 µl定量环

AZURA DAD 2.1L

二极管阵列检测器,190~700   nm

流通池

分析型高压流通池,光程10   mm, 体积10 µl

AZURA CT 2.1

柱温箱,5 – 85 °C

色谱柱

Eurospher II 100-5 C18 P, 250   x 4.6 mm,5µm,带预柱  

软件

ClarityChrom 或 OpenLab

关于该方法和配置的更多详情,请联系绿绵科技 www.lumtech.com.cn

 

HPLC方法

色谱柱:Eurospher II 100-5 C18 P, 250 x 4.6 mm,5µm,带预柱

流动相:A:Water + 0.05 % 磷酸;B:乙腈

梯度:0~60min,95% A + 5% B;

流速:1.0ml/min

柱温:40℃

进样体积:10µL

检测波长:230nm。

结论

本方法给出了白芍和赤芍提取物的差异,赤芍配方颗粒和根提取物的差异也可以采用该方法进行区别。赤芍和赤芍配方颗粒均检测到保留时间为26min的峰,而白芍未检测到此峰,该峰可作为区别赤芍和白芍的特征峰。

赤芍配方颗粒和赤芍的HPLC指纹谱图非常相似,只是芍药苷浓度不同。赤芍配方颗粒含有赤芍没有的三个特征峰,可能和它们原料的栽培相关。


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